64ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 9. Imunologia - 5. Imunologia

ATIVIDADE HEMAGLUTINANTE E ATIVADORA DO SISTEMA COMPLEMENTO PELO MESOCARPO DE BABAÇU

Elza Maria Moraes de Araújo 1,2 Caroline Silva Costa de Almeida 2 Graciomar Conceição Costa 2 Flávia Raquel Fernandes do Nascimento 2 Ana Paula Silva Azevedo dos Santos 2,3

1. Curso de Farmácia - UFMA 2. Centro de Ciências Biológicas e da Saúde, Laboratório de Imunofisiologia - UFMA 3. Profa.Dra./Orientadora - Depto de Ciências Fisiológicas - UFMA

INTRODUÇÃO:

Orbignya phalerata Mart. é uma palmeira oleaginosa pertencente a família Arecaceae, encontrada em abundância no estado do Maranhão, que concentra cerca de 75% do total de palmeiras em uma área geográfica conhecida como Região dos Cocais. Seu fruto, o babaçu, constitui-se de quatro partes, dentre elas o mesocarpo, do qual se obtém uma farinha utilizada na medicina tradicional, para o tratamento de feridas crônicas, úlceras gástricas, úlceras duodenais, diversas inflamações, como uterinas e de ovários, artrite e tumores. Por ser constituído por cerca de 60% de amido, é utilizado na alimentação como fonte de carboidratos. Os carboidratos são moléculas ativadoras do sistema imune. Presentes em superfícies celulares diversas podem ativar macrófagos e o sistema complemento, através da via das lectinas. O objetivo do presente trabalho é verificar a capacidade hemaglutinante e hemolisante de carboidrato presente no mesocarpo de babaçu (MB).

METODOLOGIA:

O extrato aquoso de mesocarpo de babaçu (EAMB) foi obtido a partir da extração de 1g de farinha de mesocarpo em 25 mL de água destilada, filtrado após 24 horas, com concentração final de 40 mg/mL. Para o teste de hemaglutinação, obteve-se o concentrado de hemácias de sangue humano O+, e preparou-se uma solução de hemácia a 1%, após diluição do concentrado com PBS 1x. Em placa de 96 poços, a solução de hemácia foi incubada em estufa por 1 hora com EAMB, nas concentrações 40, 20, 10, 5, 2,5 e 1,25mg/mL e, em seguida, realizada a contagem de rosetas ao microscópio óptico, a partir do sobrenadante. Para o ensaio de hemólise, preparou-se soluções de hemácia a 1%, a partir do concentrado de hemácias de sangue O+ diluído em PBS e em PBS + EAMB, este último em contato por 1 hora. Fez-se reagir, em placa de 96 poços, as soluções de hemácia 1% com soro do mesmo doador, a temperatura ambiente e inativado a 56ºC. Após incubação em estufa por 2 horas, centrifugou-se a placa e foi realizada a dosagem de hemoglobina do sobrenadante da reação, através da leitura em espectofotômetro a 415 nm. Os resultados foram avaliados estatisticamente utilizando o software GraphPad Prism 5.0, com análise de variância one-way ANOVA, seguido de Newman-Keuls, com p<0,05.

RESULTADOS:

Na contagem de rosetas, em triplicata de cada 10 campos, observou-se médias de 50, 18,5, 6,5, 3, 2,5 e 0 rosetas nas concentrações 40, 20, 10, 5, 2,5 e 1,25mg/mL, respectivamente, demonstrando que a aglutinação de hemácias foi proporcional à concentração de EAMB. A atividade hemolítica foi representada pela concentração de hemoglobina no sobrenadante da reação. Soluções de hemácias em contato com soro a 37ºC, em condições normais, não deveriam expressar lise, entretanto as hemácias tratadas com EAMB mostraram densidade óptica (DO)=0,37, e as não tratadas, DO= 0,13, ou seja, a concentração de hemoglobina foi maior nas hemácias tratadas com EAMB e soro a 37ºC, mostrando a ocorrência de lise. Com o soro a 56ºC, a DO foi 0,13 e 0,14 de hemácias tratadas e não tratadas com EAMB, respectivamente.

CONCLUSÃO:

A aglutinação das hemácias em presença de EAMB sugere a ligação de carboidratos com proteínas na superfície de hemácias. A lise de hemácias em contato com soro a 37º C não é mediada por uma reação antígeno-anticorpo, visto que as hemácias O+ não apresentam antígenos em sua superfície. Podemos sugerir que o EAMB provoca lise das hemácias através da ativação do sistema complemento. Essa hipótese pode ser confirmada com a ausência de lise das hemácias em contato com soro a 56ºC, visto que o aquecimento provoca desnaturação das proteínas e, consequentemente, perda de sua atividade lítica. Os dados apresentados neste trabalho complementam outros já realizados em nosso laboratório, que demonstram que o mesocarpo de babaçu é um importante modulador do sistema imune.

Palavras-chave: babaçu, hemaglutinação, sistema complemento.