64ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 6. Farmacologia - 4. Farmacologia

AVALIAÇÃO DE PARÂMETROS DE ATIVAÇÃO DE MACRÓFAGOS PELO ÓLEO ESSENCIAL DAS FOLHAS DE Eugenia uniflora L.

Klinger Antonio da Franca Rodrigues 1 Layane Valéria Amorim 1 Clarice Noleto Dias 2 Denise Fernandes Coutinho Moraes 2 Sabrina Maria Portela Carneiro 3 Fernando Aécio de Amorim Carvalho 4

1. Núcleo de Pesquisas em Plantas Medicinais - UFPI 2. Departamento de Farmácia - UFMA 3. Departamento de Bioquímica e Farmacologia - UFPI 4. Prof. Dr./Orientador - Departamento de Bioquímica e Farmacologia - UFPI

INTRODUÇÃO:

Os macrófagos encontram-se em diferentes tecidos do organismo e são fundamentais para a imunidade humoral e celular com importante papel como parte do mecanismo de defesa de um hospedeiro frente a um agente infeccioso ou a tumores. Dentre os diferentes processos de defesa utilizados pelos macrófagos estão a fagocitose, desgranulação e aumento da produção de citocinas e espécies reativas de oxigênio (ROS) como o óxido nítrico (NO) e peróxido de hidrogênio (H202). A fagocitose é o processo de reconhecimento e englobamento de microorganismo ou resíduos de tecidos que se acumulam durante uma infecção. Após a formação do fagóssomo ocorre à produção das ROS, que são essenciais para a morte do patógeno e iniciação da morte celular programada, apoptose. Vários agentes são conhecidos por estimularem o poder de defesa dos macrófagos como o lipopolissacarídeo (LPS) ou outros componentes microbianos, interferon-γ (IFN-γ), lectinas e extratos vegetais. Em função disto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a indução da capacidade fagocítica, aumento do volume lisossomal e síntese de óxido nítrico por macrófagos pelo óleo essencial de Eugenia uniflora L., espécie promissora com atividade leishmanicida.

METODOLOGIA:

Para todos os ensaios realizados, macrófagos peritoneais murinos foram elicitados e plaqueados a 1x105 células por poço com 100 μL de meio RPMI 1640 suplementado com 10% SFB, penicilina (100 U/mL) e estreptomicina (100 μg/mL) e incubados por 4 h em estufa a 37 ºC e 5 % de CO2. A seguir, os macrófagos foram expostos ao óleo essencial de E. uniflora nas concentrações de 100; 50; 25; 12,5; 6,25; 3,12 μg/mL por 48 h. Após esse período, na avaliação da capacidade fagocítica, foram adicionados 10 μL de solução de zymosan corado e incubados por 30 min e paralisado o processo de fagocitose com a adição de 100 µL de fixador de Baker. Para se avaliar o volume lisossomal, foram adicionados 10 μL de solução de vermelho neutro e incubados por 30 min. A seguir, o sobrenadante foi descartado e adicionado 100 µL de solução de extração para solubilizar o vermelho neutro presente no interior das vesículas de secreção lisossomais. A produção de óxido nítrico foi avaliada transferindo-se o sobrenadante para outra placa para a dosagem de nitritos onde foi adicionado reagente de Griess 1% na proporção de 1/1. As absorbâncias de todos os testes foram lidas a 550 nm em espectrofotômetro. Foram realizadas ANOVA seguida pelo teste de Tukey com p < 0,05 como nível máximo de significância estatística.

RESULTADOS:

Os resultados mostraram que o óleo essencial de E. uniflora promoveu um incremento significativo na atividade fagocitária dos macrófagos nas concentrações de 100, 50, 25 e 12,5 μg/mL de 62, 57 e 36 %, respectivamente. O aumento do volume lisossomal de macrófagos foi avaliado pela retenção de vermelho neutro. O óleo essencial promoveu um significativo aumento na retenção do vermelho neutro nas vesículas de secreção de macrófagos nas concentrações de 100, 50 e 12,5 μg/mL de 56, 53 e 23 %, respectivamente. É possível que o aumento da capacidade fagocítica associado ao aumento do compartimento lisossomal contribua para a atividade leishmanicida dos macrófagos induzida pelo óleo essencial de E. uniflora. Os macrófagos apresentaram produção reduzida de óxido nítrico, comparado ao controle, em todas as concentrações testadas, o que demonstra que sua atividade leishmanicida pode atuar por outros mecanismos.

CONCLUSÃO:

O presente trabalho contribuiu com a informação de parâmetros de ativação de macrófagos induzidas pelo óleo essencial de Eugenia uniflora L. que podem ser incrementados contribuindo para a promissora atividade leishmanicida da espécie. Foi evidenciado que o óleo essencial induz a atividade de macrófagos pelo aumento da capacidade fagocítica e aumento do volume lissosomal. Já a produção de óxido nítrico foi diminuída o que sugere que a atividade leishmanicida pode não atuar por essa via.

Palavras-chave: Eugenia uniflora L., Capacidade fagocítica, Volume Lisossomal.