64ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 5. Genética Vegetal

LOCALIZAÇÃO DE BLOCOS HETEROCROMÁTICOS DAPI E CMA3 ESPÉCIE-ESPECÍFICOS EM Passilflora L.

Paesla Vitória dos Santos Ramos 1 Margarete Magalhães de Souza 2

1. Departamento de Ciências Biológicas, Universidade Estadual de Santa Cruz-UESC. 2. Profa. Dra./Orientadora - Depto.de Ciências Biológicas – UESC

INTRODUÇÃO:

O gênero Passiflora está bem distribuído em regiões tropicais com representantes de grande importância econômica, apresentam frutos, flores e folhagens exuberantes que enaltecem seu potencial ornamental. Algumas correm risco de extinção, tornando viável a necessidade do fortalecimento de estudos genéticos e de conservação visando à manutenção e preservação, principalmente das espécies nativas e ameaçadas. Diante da ausência de trabalhos referentes à caracterização quanto à localização de marcadores espécie-específicos, como à qualificação na diferenciação de distribuição citogenética do cariótipo para as espécies estudadas (MELO et al.,2010). Foram realizadas as técnicas citogenéticas clássicas e bandamentos cromossômico, com aplicação da coloração diferencial com fluorocromos, sendo os mais empregados em citogenética de vegetal (SCHWEIZER, 1976; SUMNER, 1990) o DAPI (4´,6 diamidino-2-fenilindol), que apresenta afinidade para regiões de bases ricas em AT, e o CMA3 (cromomicina A3), que apresenta afinidade para regiões de bases ricas em GC. A análise citogenética permite a descrição de informações citológicas úteis para a caracterização de germoplasma, para estudos citotaxonômicos, filogenéticos e aplicáveis ao melhoramento genético vegetal.

METODOLOGIA:

Os genótipos de Passiflora bahiensis, P. serrato-digitata, foram mantidos no Banco Ativo de Germoplasma (BAG-Passifloras) da UESC. Ápices de raízes foram coletados e pré-tratados com antimitótico (8HQ), fixados em Carnoy (ácido acético: etanol 3:1). As radículas sofreram processo de digestão enzimática (enzima celulase 2% e pectinase 20%) em câmara úmida a 37°C e lavadas com água destilada. Em seguida foi feita a técnica de esmagamento do meristema em ácido acético 45% e o material foi congelado em nitrogênio líquido. Para o bandamento as lâminas foram envelhecidas por três dias à temperatura ambiente. Sendo realizada a coloração com fluorocromos CMA3 por uma hora, estocada em câmara úmida e escura, seguindo de lavagem com água destilada para remoção da lamínula e posterior aplicação DAPI por trinta minutos e em seguida montadas com glicerol acrescido de meio McIlvaine (contendo MgCl2). A visualização citológica foi realizada após três dias utilizando microscópio de fluorescência. A fotodocumentação foi realizada utilizando um sistema digital acoplado ao microscópio. Após aplicação de fluorocromos e análises, as preparações citológicas foram descoradas com Carnoy e etanol, sendo em seguida coradas com Giemsa 3% por 15-20 minutos.

RESULTADOS:

Ambas as espécies possuem número diplóide 2n = 18 cromossomos e núcleo interfásico do tipo semi-reticulado, sendo P. serrato-digitata com padrão de condensação proximal em pró-metáfases. A coloração convencional revelou a presença de apenas um par cromossômico satelitado enquanto que a da dupla coloração revelou mais um par de satélites não distendido, demonstrando a existência de polimorfismo em relação ao tamanho do satélite. O cariótipo é bastante simétrico com morfologia cromossômica que variou de metacêntrico a submetacêntrico. Em P. bahiensis houve variação de 3,32 µm a 2,38 µm e complemento haplóide de 24,89 µm. P. serrato-digitata apresentou variação de 4,98 µm a 2,85 µm e complemento haplóide de 36,24 µm. A coloração convencional em P. bahiensis revelou a presença de um par cromossômico satelitado, enquanto que em P. serrato-digitata não houve visualização de satélites. Na dupla coloração não foram visualizadas bandas DAPI+, pois esta foi fraca nas regiões coradas com CMA3+. P. serrato-digitata evidenciou blocos terminais corados com CMA3+/DAPI- fortemente corados e blocos de menor intensidade. Ambas as colorações contribuíram de maneira significativa para as observações descritivas dos parâmetros comparativos.

CONCLUSÃO:

Os resultados obtidos fornecem informações aplicáveis à análise citogenética entre representantes do gênero Passiflora, atenuando a carência de trabalhos existentes na área referentes à caracterização da heterocromatina base-específica. A localização de marcadores espécie-específicos possibilitou a caracterização citogenética comparativa das relações genômicas entre P. bahiensis e P. serrato-digitata. A coloração convencional e a aplicação dos fluorocromos possibilitaram a descrição dos parâmetros citogenéticos mais utilizados na caracterização cariotípica, como número e tamanho cromossômico, assim como a localização de satélites e da heterocromatina base-específica rica em GC e AT. Por outro lado conclui-se que é necessária a adição de mais estudos citogenéticos para o gênero, gerando informações úteis para futuras inferências acerca da biologia dessas espécies.

Palavras-chave: Passifloraceae, Bandamento, Cariótipo.