64ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 1. Biofísica - 1. Biofísica Celular

CARACTERIZAÇÃO ELETROFISIÓLOGICA DOS CANAIS IÔNICOS DAS CÉLULAS MACL-1 E MGSO-3 DE TUMOR PRIMÁRIO DE CÂNCER DE MAMA

Rafaella Mathilde dos Santos Assis 1 Natália Fontana 2 Dawidson Gomes 3 Alfredo Miranda Goes 3 Jader Santos Cruz 3 Andréia Laura Prates Rodrigues 4

1. Faculdade de Ciências Humanas, Sociais e da Saúde - Universidade FUMEC 2. Universidade Federal de Minas Gerais- UFMG 3. Prof. Dr. - Depto. de Bioquímica e Imunologia- UFMG 4. Profa. Dra. Orientadora/ Coordenadora - Universidade FUMEC

INTRODUÇÃO:

Câncer é um conjunto de doenças caracterizadas pela multiplicação desordenada das células. As células cancerosas perdem os mecanismos de controle do crescimento celular, resistem ao fenômeno da morte celular programada (apoptose), não se diferenciam e não apresentam inibição por contato. A participação dos canais iônicos parece ser fundamental para a divisão, proliferação e morte celular (processos que se encontram alterados nas células tumorais). A investigação da participação dos canais iônicos no desenvolvimento de tumores tem crescido bastante nos últimos anos. Importante relatar que os canais iônicos podem ser novos alvos pela busca de fármacos no combate ao câncer. Entretanto, a maior parte destes estudos foram realizados em células cancerosas em estágios mais avançados. O presente estudo teve como objetivo a caracterização eletrofisiológica dos canais iônicos dependentes de voltagem presentes nas células MGSO-3 e MACL-1, obtidas de carcinoma mamário em estágios iniciais.

METODOLOGIA:

As culturas celulares foram mantidas a 37ºC, 5,0% de CO2, em garrafas para cultivo celular com meio de cultura DMEM (Sigma) suplementado com 10% de Soro Fetal Bovino e 1% de antibióticos (penicilina/estreptomicina). O repique e o preparo das placas, para os experimentos eletrofisiológicos, ocorreram semanalmente. A técnica utilizada para o registro das correntes foi a de patch clamp, modo whole cell. No protocolo usado, a partir de um potencial de holding de -70mV, foram aplicados pulsos de potencial crescente até 60 mV com duração de 100 ms. As soluções utilizadas continham (em mM): Externa geral - NaCl 140, KCl 5, CaCl2 2, MgCl2 0,5, HEPES 10, Glicose 5; Externa com bloqueador não seletivo para os canais de potássio – NaCl 50, TEA-Cl 90, KCl 5, CaCl2 2, MgCl2, HEPES 10, Glicose 5; Externa com baixa concentração de cloreto - CsOH 130, TEA-Cl 20, CaCl2 1, HEPES 10, Glicose 5, Ácido Aspártico 130; Interna - KCl 130, EGTA 10, HEPES 10. Tetraetilamônio, TEA, e a retirada completa do cloreto da solução foram utilizados para inibir respectivamente canais de potássio e cloreto.

RESULTADOS:

Não foi verificado em nenhuma das linhagens correntes de entrada de cálcio ou sódio. As células, MACL-1 e MGSO-3, apresentaram a presença de uma corrente de efluxo, que poderia se tratar de uma corrente de potássio. Os testes com solução externa para bloquear canais de potássio, com TEA e césio, mostraram uma diminuição desta corrente nas células MGSO-3. Nas células MACL-1 também houve diminuição, porém não tão acentuada. Comparando-se os resultados encontrados, nas células MGSO-3 verificamos que a densidade de corrente no potencial de 60 mV na solução com bloqueador para canais de potássio diminuiu em 51,9 ± 7,6% (n=3) em relação à densidade de corrente mensurada na condição controle. Para a linhagem celular MACL-1 essa diminuição foi de, em média, 24,9 ± 3,3% (n=3). Numa etapa seguinte, investigamos a presença dos canais de cloreto. Usamos uma solução extracelular contendo baixa concentração de cloreto e nas duas linhagens houve diminuição significativa da corrente de efluxo, sendo que na MGSO-3 essa diminuição foi de, em média, 31,7 ± 16,3% (n=3), e na MACl-1 de 64,1 ± 12,9% (n=3).

CONCLUSÃO:

Os resultados encontrados demonstram que estas linhagens de tumor primário de mama não possuem correntes de sódio ou cálcio dependentes de voltagem. No entanto, ambas possuem correntes de potássio sensíveis ao TEA. A diminuição da concentração de cloreto no meio extracelular reduziu a densidade de corrente de cloreto.

Palavras-chave: Câncer de mama, Canais Iônicos, Caracterização Eletrofisiológica.