63ª Reunião Anual da SBPC

E. Ciências Agrárias - 1. Agronomia - 5. Agronomia

DIVERGÊNCIA GENÉTICA ENTRE HÍBRIDOS COMERCIAIS DE MILHO EM LOCOS SSR E SUA RELAÇÃO COM AS ESTIMATIVAS DE HETEROSE DE CRUZAMENTOS

Paula Barcelos Simões de Oliveira Lima 1 Giselle Santos Davi 1 Alexandre Guedes Siqueira Coelho 2

1. Universidade Federal de Goiás 2. Prof. / Orientador – Depto. de Melhoramento de Plantas – UFG

INTRODUÇÃO:

O milho (Zea mays) é uma das principais culturas de grãos do mundo e sua importância está associada principalmente às variadas possibilidades de uso. A grande demanda comercial deste produto desencadeia a necessidade de se obter uma lavoura em boas condições para que se assegure a produtividade desejada e por isso, a demanda por sementes híbridas, com alta qualidade, tem aumentado significativamente nos últimos anos, devido, principalmente, à alta competitividade do mercado. Uma das etapas mais importantes de um programa de melhoramento é a escolha da população a ser trabalhada e a utilização de híbridos comerciais pode ser uma alternativa para a constituição de populações base. A utilização de marcadores moleculares, capazes de detectar o polimorfismo diretamente no DNA como os SSR (Simple Sequence Repeats), figura como uma alternativa para se avaliar previamente a divergência genética entre possíveis genitores do programa. Assim, este trabalho teve como objetivos: realizar a otimização de um protocolo de extração de DNA a partir de tecido de folhas e palhas secas de milho, realizar a otimização das condições das reações de PCR (Polymerase Chain Reaction) e contribuir para a formação de recursos humanos na área de Biotecnologia aplicada ao melhoramento genético de plantas.

METODOLOGIA:

Para a otimização dos protocolos de extração de DNA genômico foram utilizadas amostras de folhas e palhas secas de plantas de híbridos comerciais que foram mantidos na área experimental da Escola de Agronomia e Engenharia de Alimentos, da Universidade Federal de Goiás, no município de Goiânia-GO, e na Estação Experimental da Planagri, no município de Santo Antônio de Goiás-GO. A otimização do protocolo de extração de DNA foi feita a partir de adaptações dos protocolos desenvolvidos por Slotta et al. (2008) e Doyle & Doyle (1987). Sucintamente, o protocolo Slotta et al. (2008) envolveu a maceração do tecido vegetal em nitrogênio líquido, a adição de um tampão de extração (SDS 1,25%) e a adição de acetato de amônio (6M) gelado. O protocolo de Doyle & Doyle (1987) foi aplicado pela maceração do tecido vegetal no equipamento Tissuelyser da Quiagen, adição de tampão de extração (CTAB 2%), adição de solução 24:1 (clorofórmio:álcool isoamílico) e adição de solução CTAB 10%. A quantidade de DNA obtida em cada amostra foi estimada em gel de agarose 1% através da comparação com quantidades conhecidas de DNA de fago. Em seguida procedeu-se as reações de PCR em um termociclador e a eletroforese em gel de poli-acrilamida, realizada segundo protocolo descrito em Creste et al. (2001).

RESULTADOS:

Os resultados obtidos com a aplicação do protocolo de extração de DNA otimizado foram bastantes satisfatórios. Quantidades suficientes de DNA de boa qualidade foram obtidas para todos os híbridos. Estas amostras de DNA estão sendo submetidas a reações de PCR para amplificação de locos marcadores SSR para genotipagem destes materiais. Estes genótipos permitirão a condução das análises de divergência genética entre estes híbridos, que se constituirão em subsídios importantes na tomada de decisão para a constituição das populações base para o programa de melhoramento. É importante considerar que apesar dos resultados das genotipagens ainda não terem sido obtidos, as atividades realizadas permitiram ao bolsista o estabelecimento de um primeiro contato com as técnicas normalmente utilizadas para a aplicação de marcadores moleculares em plantas.

CONCLUSÃO:

Foram otimizados protocolos de extração de DNA a partir de tecido de folhas e palhas secas de milho, com vistas à aplicação subsequente das técnicas de marcadores moleculares. Os protocolos obtidos permitiram a obtenção de quantidades suficientes de DNA genômico de boa qualidade, para utilização em reações de PCR para amplificação de locos SSR. E as atividades realizadas permitiram à bolsista um primeiro contato com as técnicas normalmente utilizadas para a aplicação de marcadores moleculares no melhoramento genético de plantas.

Palavras-chave: Zea mays, Microssatélites, Marcadores moleculares.