63ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 3. Genética Humana e Médica

AVALIAÇÃO DA GENOTOXICIDADE E CITOTOXICIDADE DE CÉLULAS DE SARCOMA 180 TRATADAS COM UM NOVO COMPLEXO DE RUTÊNIO

Francyelli Mariana dos Santos Mello 1 Aliny Pereira Lima 1 Elisângela de Paula Silveira Lacerda 1,2

1. Lab. de Genética Molecular e Citogenética, Dpto. de Biologia Geral, ICB/UFG 2. Profa. Dra / Orientadora, Dpto. de Biologia Geral, ICB/UFG

INTRODUÇÃO:

O câncer é uma das doenças mais comuns e grave vista na medicina clínica que afeta, aproximadamente, 200 tipos de células, resultado de um conjunto de manifestações patológicas, que se desenvolvem em três etapas: iniciação, promoção e progressão. Os sarcomas de partes moles compõem um grupo heterogêneo de neoplasias malignas com diferentes padrões morfológicos da linhagem mesenquimal, representando cerca de 1% das neoplasias malignas em adultos e 15% dos tumores pediátricos. Atualmente, no tratamento do câncer os complexos de platina são os mais utilizados, porém a busca de novos fármacos menos tóxicos e mais seletivos se torna imprescindível para a eficácia do tratamento do câncer. Por isso, novos agentes antitumorais baseados em metais não associados à platina tem sido desenvolvidos. Dentre os agentes antineoplásicos provenientes dos metais, os mais promissores são os complexos de rutênio por demonstrarem propriedades antimetastática, baixa toxicidade e alta seletividade para células tumorais. Com base no exposto, o estudo teve por objetivo avaliar os possíveis efeitos citotóxicos e genotóxicos de um novo complexo de rutênio com ligantes de aminoácidos em células tumorais de sarcoma 180 (S180) mantidas em cultura in vitro a 37º C e 5% CO2.

METODOLOGIA:

Para avaliar a atividade citotóxica do complexo RuMet foi utilizado o método colorimétrico do MTT. O princípio deste método descrito por Mosman (1983) consiste em medir indiretamente a viabilidade celular pela atividade enzimática mitocondrial das células vivas. Para o teste do MTT, 1 x 105 de células foram semeadas em microplacas de 96 poços na ausência ou presença do complexo RuMet (0,2 a 200 µM) ou cisplatina (0,2 a 200 µM) e incubadas em estufa a 37oC e 5% de CO2. A quantificação da densidade óptica foi medida em espectrofotômetro. O Ensaio Cometa é um método versátil e sensível para a detecção de quebras de fita simples e dupla no DNA. Para o estudo de genotoxicidade, foi utilizada a versão alcalina do ensaio cometa segundo Singh, (1988), onde 1 x 105 de células tumorais S180 foram semeadas na ausência ou presença do complexo RuMet (0,2; 2; 20 e 50 µM) ou do controle positivo Cisplatina (25 e 50 µM) por 48 h. A análise dos cometas foi realizada visualmente, de acordo com a migração dos fragmentos conforme classificação proposta por Cavalcanti (2008) em: classe 0 (nenhum dano), classe 1, classe 2, classe 3, classe 4. Foram examinados aleatoriamente 100 nucleóides de cada concentração, assim como do controle negativo e positivo.

RESULTADOS:

O complexo de RuMet apresentou citotoxicidade significativa para as concentrações testadas. De acordo com a análise estatística o RuMet na concentração de 28,17 µM inibiu em 50% a viabilidade celular do S180 após 48 horas de tratamento. A cisplatina revelou IC50 para as células tumorais S180 de 48,11 µM. Após 48 h de exposição, RuMet aumentou significativamente o índice de danos em relação ao controle negativo (p <0,001). Os complexos de rutênio com ligantes de aminoácidos foram, recentemente, sintetizados e testados. Almeida (2009) realizou diversos ensaios de atividade antitumoral com diferentes complexos de rutênio com aminoácidos, os quais revelaram resultados promissores destes complexos de rutênio frente às linhagens tumorais testadas, visto que os valores de IC50 desses rutênios foram inferiores aos valores de IC50 da cisplatina. Nosso estudo revelou o mesmo, após 48 horas de exposição ao RuMet a IC50 (28,17 µM) das células tumorais de S180 foi inferior ao da cisplatina (48,11 µM) nas mesmas condições. Para o estudo de genotoxicidade verificou-se que as concentrações 2, 20 e 50 µM são estatisticamente significativas quando comparados com o controle negativo. O índice de danos, para esses tratamentos variou de 179 a 261, sendo o índice de dano para o controle negativo de 26.

CONCLUSÃO:

O RuMet é citotóxico e genotóxico para células tumorais de S180. O complexo de rutênio com ligante de aminoácido apresentou efeito citotóxico frente às células tumorais Sarcoma 180 apresentando uma IC50 de 28,17 µM e induziu danos ao DNA dessas células.

Palavras-chave: Complexo de Rutênio, Citotoxicidade, Genotoxicidade.