63ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 11. Morfologia - 5. Histologia

ANÁLISE HISTOLÓGICA DE ARCABOUÇOS DE PLDLA/PCL-T PREVIAMENTE CULTIVADOS COM FIBROCONDRÓCITOS APÓS IMPLANTE COMO PRÓTESE DE MENISCO

Silvia Mara de Melo Cattani 1,2 Andrea Rodrigues Esposito 2 Marlon Moda 2 Túlio Cardoso 2 Maria Lourdes Peris Barbo 2 Eliana Aparecida de Rezende Duek 1,2

1. Depto. de Ciências Fisiológicas da Pontifícia Universidade Católica de São Paulo - PUC/SP – FCMS 2. Laboratório de Biomateriais – PUC-SP - FCMS

INTRODUÇÃO:

Os meniscos são essenciais para o bom desempenho da articulação do joelho e a sua presença é fundamental para suportar e distribuir de 50 a 70% do peso corporal, promovendo absorção de impactos, lubrificação e adaptação às superfícies da tíbia, garantindo assim, proteção da articulação e prevenção de lesões, como a osteoartrose. Tendo em vista que a região avascular do menisco não apresenta capacidade regenerativa, a engenharia tecidual utilizando arcabouços poliméricos biorreabsorvíveis representa uma opção para o tratamento de lesões do menisco. Devido às suas características de degradação e biorreabsorção os poli (-hidroxi ácidos) apresentam-se como uma alternativa promissora para regeneração tecidual e fazem parte de uma família amplamente utilizada na área biomédica, pois também são biocompatíveis. Estudos recentes comprovaram que o cultivo celular pode aumentar a viabilidade do processo de cura de lesões na fibrocartilagem. O objetivo deste trabalho foi estudar, por meio da análise histológica, a influência do pré-cultivo de fibrocondrócitos sobre arcabouços de poli(L-co-DL-ácido láctico)/Poli(caprolactona triol) (PLDLA/PCL-T) para aplicação como prótese de menisco, verificando o potencial do cultivo alógeno e a influência do material na regeneração tecidual.

METODOLOGIA:

Arcabouços de PLDLA/PCL-T (90/10) contendo sacarose (50% m/v) com granulometria entre 250 e 500 m, foram obtidos pelo método de evaporação do solvente. Fibrocondrócitos provenientes do menisco de coelhos foram isolados por extração primária, semeados em uma densidade de aproximadamente 106 células/mL e cultivados por 21 dias sobre os arcabouços. Posteriormente esses dispositivos foram implantados no menisco medial do joelho de 20 coelhos Nova Zelândia, após meniscectomia total. A via de acesso utilizada para o implante foi a parapatelar medial, longitudinal, obtendo-se três tratamentos: implante do arcabouço com pré-cultivo celular, implante do arcabouço puro sem o pré-cultivo e controle (defeito vazio), no qual nenhum implante foi realizado. Em tempos pré-determinados de 12 e 24 semanas de implante, os animais foram sacrificados e as próteses foram removidas juntamente com o tecido ao seu redor e processadas para análise histológica de acordo com as técnicas convencionais para microscopia de luz e coloração com Hematoxilina e Eosina (HE), Tricrômico de Masson (TM). Para a historesina utilizou a coloração com solução de Azul de Toluidina (AT).

RESULTADOS:

Avaliações macroscópicas e histológicas dos “neomeniscos” foram realizadas após 12 e 24 semanas de implante. Os implantes realizados com os arcabouços poliméricos independentemente do cultivo celular apresentaram-se bem adaptados com os tecidos circundantes, sem rejeição aparente, infecção ou resposta crônica inflamatória, mostrando que o neotecido manteve o formato biológico. Estes resultados não foram observados no grupo controle, uma vez que o tecido recém formado se desenvolveu fixado ao platô tibial na região posterior e não preencheu toda a área anteriormente ocupada pelo menisco. A presença de tecido fibrocartilaginoso maduro com fibras colágenas organizadas foi, predominantemente, observada nos implantes realizados com os arcabouços pré-cultivados em comparação com os implantes sem células após 24 semanas. Há presença de metacromasia nas lâminas com implante do arcabouço. Os controles apresentaram cicatrização com formação de cartilagem hialina central e presença de coxim adiposo e fibrose com pequenas áreas de aspecto sugestivo de fibrocartilagem concentrando-se nas bordas diferentemente dos animais submetidos a implante polimérico.

CONCLUSÃO:

O arcabouço polimérico de PLDLA/PCL-T permitiu o crescimento de um tecido semelhante a fibrocartilagem, com boa biorreabsorção e biocompatibilidade in vivo, apresentando grande potencial para ser utilizado como prótese de menisco. Este estudo favorece o uso da cultura de células alógenas para regeneração de menisco, dentro dos princípios da engenharia tecidual.

Palavras-chave: Arcabouço polimérico biorreabsorvível, Cultura de fibrocondrócitos, Menisco.