63ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 2. Microbiologia Aplicada

INTERFERÊNCIA DE METABÓLITOS BACTERIANOS SOBRE A CAPACIDADE FAGOCÍTICA E MICROBICIDA DE MACRÓFAGOS PERITONEAIS MURINOS

Rubens Ferracini Junior 1 Virna Aina Mankievich 1 Fernanda Ancona Tardelli 1 Aristeu Gomes da Costa 1

1. Laboratório II – Microbiologia - Departamento Farmácia – Centro Universitário Barão de Mauá - Ribeirão Preto - SP

INTRODUÇÃO:

Próbiótico é termo relativo a determinadas preparações alimentares, em cuja constituição encontram-se microrganismos viáveis, que podem interferir diretamente na composição de microbiota intestinal humana, e também interagir diretamente com a mucosa intestinal, estimulando peristaltismo e/ou a produção de substâncias com atividades regulatórias sobre funções secretórias. Tal interferência pode-se dar por competição direta de microrganismos presentes nos probióticos, com outros microrganismos patógenos ou não, e esta contaminação está relacionada a nicho e nutrientes. Os microrganismos presentes nos probióticos, normalmente pertencem aos mesmos gêneros de bactérias de microbiota normal, como Lactobacillus e Streptococcus, que são produtores de variados metabólitos capazes de estimular muitos tipos celulares diferentes. Neste contexto, o presente trabalho avalia uma eventual interferência de metabólitos de Lactobacillus lactis e Lactobacillus acidophilus, sobre as atividades fagocitária e microbicida de macrófagos murinos, após estimulação intraperitoneal.

METODOLOGIA:

As bactérias Lactobacillus lactis e Lactobacillus acidophilus, e a levedura Candida albicans, obtidas junto à coleção do Laboratório II de Microbiologia do Centro Universitário Barão de Mauá, foram utilizadas. As bactérias foram cultivadas em caldo BHI, por 120 horas a 37ºC. Depois, filtradas em membranas Millipore de 0,45 µm de diâmetro de poro e os filtrados obtidos foram adicionados de citrato de amônio, para precipitação de proteínas. Os precipitados foram purificados por diálise em água deionizada, dessecados, pesados e ressuspensos em concentrações de 125, 250, 500 e 1000 µg/m, utilizadas nos ensaios biológicos com camundongos. As leveduras foram cultivadas em Sabouraud-Dextrose Agar, por 48 horas a 37ºC, inativadas por autoclavação, lavadas, e ressuspensas em solução salina fisiológica tamponada, em densidade celular de 1x104 células/mL. Camundongos suíços machos, 30 dias e 30 gramas, foram divididos em 4 grupos, tratados intraperitonealmente com metabólitos de L. lactis e L. acidophilus (02), glucana (01) e PBS (01), e acompanhados por 07 dias, quando foram sacrificados, para obtenção do lavado peritoneal de onde os macrófagos foram separados e utilizados em ensaios de migração e ativação celular e de índice fagocítico contra C. albicans, em meio de RPMI 1640.

RESULTADOS:

Os metabólitos de Lactobacillus lactis e Lactobacillus acidophilus, foram capazes de induzir incrementos de migração celular de 43 e 65% em relação ao controle tratado apenas com solução salina fisiológica tamponada. No caso dos metabólitos de Lactobacillus acidophilus, este resultado foi superior ao resultado com controle positivo, a glucana. Na determinação de ativação celular, pelo teste de PRS, a porcentagem de células ativadas em relação ao controle negativo foi superior em 60% para os macrófagos de animais que receberam metabólitos de Lactobacillus lactis, e 75% para os que receberam metabólitos de Lactobacillus acidophilus. Os resultados de índice fagocítico também foram melhores para os metabólitos de Lactobacillus acidophilus: 78% além do controle tratado com solução salina fisiológica, contra incremento de 47% para macrófagos de animais que receberam metabólitos de Lactobacillus lactis. Quando o meio RPMI 1640, utilizado no teste de índice fagocítico foi plaqueado, após centrifugação e lise dos macrófagos, verificou-se que a atividade microbicida para os macrófagos de animais tratados com metabólitos de Lactobacillus acidophilus, foi 45% mais eficiente que no caso dos animais tratados com metabólitos de Lactobacillus lactis.

CONCLUSÃO:

Os resultados obtidos, sugerem que metabólitos de Lactobacillus lactis e Lactobacillus acidophilus, desenvolvam efeito potencializador sobre eventos de proteção relacionadas à imunidade celular: atividades fagocítica e microbicida. Estas atividades são desempenhadas por células que pertencem ao braço inespecífico do sistema imune, principalmente macrófagos e neutrófilos, que têm uma distribuição muito ampla no corpo do hospedeiro, e cujas atividades podem ser moduladas por inúmeros mediadores. Os metabólitos bacterianos utilizados para estimulação de macrófagos murinos, são entendidos normalmente como moléculas que intensificam a competição direta de microrganismos de microbiota normal com patógenos externos, ou melhoram a estimulação do peristaltismo intestinal, auxiliando desta forma a prevenção de infecções. Porém, componentes protéicos presentes nestes metabólitos apresentaram um comportamento estimulatório sobre macrófagos murinos, que muito semelhante ao obtido com uma molécula já reconhecida como bom imunoestimulador: β-glucana fungica. Embora a composição destes metabólitos necessite melhor caracterização, fica evidente a facilidade relativa de obtenção deste tipo de imunomoduladores em comparação com a extração de componentes de parede celular como as glucanas.

Palavras-chave: Lactobacillus, atividade fagocitária, imunomodulador.