61ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 3. Enzimologia

PRECIPITAÇÃO COM SULFATO DE AMÔNIA DO COMPLEXO XILANOLÍTICO PRODUZIDO POR Asperguillus sp. ISOLADO DO SOLO AMAZÔNICO.

Paola Guidobono Nunes 1

1. Universidade Federal do Amazonas/UFAM

INTRODUÇÃO:

Hemiceluloses são polissacarídeos não celulósicos que constituem a parede celular das plantas, formadas por polímeros lineares e ramificados, contendo até seis açucares ou seus derivados. A xilana é a principal constituinte da hemicelulose, sendo enzimáticamente degradada por xilanases. O interesse em enzimas degradadoras de xilana cresceu nos últimos anos devido ao potencial de aplicação biotecnológico. Pesquisas de sistemas xilanolíticos em microorganismos vêm se tornando cada vez mais importante ecológica e economicamente, onde os fungos despertam interesse em virtude de elaborarem compostos importantes nos setores alimentícios, têxtil, médico, dentre outros. Estudos das potenciabilidades das espécies da região amazônica ainda pouco exploradas devem ser incentivados visando inovação tecnológica. O presente trabalho tem como objetivo obter o complexo xilanolítico produzido por Asperguillus sp. isolado do solo da região Amazônica através de precipitação com sulfato de amônia.

METODOLOGIA:

O fungo Asperguillus sp. foi inoculado em meio sólido BDA em condições estacionárias por 7 dias a 28°C e utilizado como fonte de esporos. Feita a suspensão de conídeos em H2O destilada contendo 4,8x107 esporos/mL, inoculou-se 1ml da suspensão em 50ml de meio líquido sintético constituído por: NaNO3(3g/L),K2HPO4(1g/L), MgSO4.7H2O(0,5g/L), KCl(0,5g/L), FeSO4. 7H2O(10mg/L) e 1% (m/v) de xilano de aveia como fonte de carbono, posteriormente submetido a fermentação estacionárias por 5 dias em temperaturas de 32 e 35°C respectivamente. Os micélios foram separados por filtração a vácuo e o filtrado de cultura utilizado como fonte enzimática para dosagem de xilanase (método dosagem açúcar redutor) e proteína, posteriormente submetidos a precipitação com sulfato de amônia de 0 a 40% e de 40 a 80%, centrifugados a 4000rpm por 45 minutos a 4°C. Os precipitados foram ressuspendidos em tampão Acetato pH 6,0 e assim como os sobrenadantes, dosados as atividades xilanolíticas e proteínas.

RESULTADOS:

Os melhores resultados obtidos em meio liquido de cultivo contendo xilano a 1% como fonte de carbono, sob condição estacionária foi á 32°C, precipitado com 80% de sulfato de amônia, onde obtivemos uma atividade xilanolítica de 3.264,840 U/mg de proteína, ao compararmos com a atividade xilanolítica do filtrado bruto antes da precipitação que era de 119,251 U/mg de proteína, observamos uma otimização da atividade xilanolítica em 27 vezes.

CONCLUSÃO:

Os resultados significativos evidenciaram a viabilidade de utilização de sulfato de amônia como ferramenta alternativa eficiente para precipitação e pré-purificação do extrato enzimático xilanolítico para posterior utilização industrial.

Palavras-chave: Asperguillus, Xilanases, Precipitação.