60ª Reunião Anual da SBPC

INTRODUÇÃO:

As abelhas são importantes insetos polinizadores e produtores de compostos como o mel que, embora bastante apreciado, pode ter sua qualidade comprometida pela presença de resíduos de fármacos antimicrobianos, principalmente da classe sulfonamidas. Na apicultura, estes compostos são utilizados no tratamento e prevenção da “cria pútrida” em abelhas, doença provocada pela bactéria Paenebacillus larvae, resultando na presença de contaminantes no mel das abelhas. A falta do adequado controle de resíduos no mel brasileiro levou ao embargo, em 2006, pela União Européia, causando perdas econômicas importantes para o país. Para garantir a qualidade do mel, é necessário que se cumpram as exigências estabelecidas no Plano Nacional de Controle de Resíduos em Produtos de Origem Animal (PNCR), especificamente no Programa Setorial de Resíduos em Mel, PCRM, onde é citado o controle de resíduos de sulfonamidas, tendo estabelecido um Limite Máximo de Resíduo (LMR)em mel de 100 µg / kg. Neste trabalho foram estudadas as principais condições para a determinação das seguintes sulfonamidas: sulfadiazina, sulfadimidina, sulfadimetoxina e sulfatiazol (citadas no PCRM), estabelecendo-se as bases para o desenvolvimento do método cromatográfico para tais fármacos em mel.

METODOLOGIA:
Estudos preliminares consistiram no estabelecimento das condições cromatográficas para análise das sulfanamidas. O equipamento utilizado foi um cromatógrafo a líquido da Varian, modelo ProStar 335, equipado com duas bombas, válvula manual com volume de injeção de 20 µL e detector de arranjo de diodos. Utilizou-se coluna analítica e coluna de guarda Phenomenex (150 mm x 4,6 mm, 4 µm, e 4 mm x 2 mm, 4μm, respectivamente) e os solventes acetonitrila e metanol (grau HPLC, ambos da Merck), além de tampão acetato 0,05 mol L^-1 (pH 4,5), preparado com água desionizada, para a fase móvel. Os padrões de sulfonamidas usados foram sulfadiazina, sulfametazina, sulfadimetoxina e sulfatiazol da Sigma-Aldrich, todos de pureza superior a 99%. As soluções-estoque de todos os padrões foram preparadas por dissolução de cada composto em metanol, na concentração de 100 mg L^-1, em seguida armazenadas a -16 graus Celsius. Soluções de trabalho foram preparadas diariamente pela diluição das soluções estoque em solução tampão acetato pH 4,5 e armazenadas a 4 graus Celsius.

RESULTADOS:
Devido às diferenças de solubilidade das sulfonamidas estudas, bem como às características de detecção, foram preliminarmente investigadas a composição da fase móvel e os comprimentos de máxima absorção para cada composto. A apropriada separação cromatográfica foi obtida em 30 min, utilizando-se gradiente de eluição com solventes acetonitrila e tampão acetato pH 4,5. O fluxo da fase móvel foi de 1 mL min^-1, com volume de injeção de 20 µL. O detector foi ajustado para 270 nm, comprimento de onda de máxima detecção para o conjunto de sulfonamidas. Devido à baixa solubilidade de algumas das sulfonamidas estudadas em metanol, este solvente não apresentou satisfatória separação cromatográfica. A utilização de solução-tampão na fase móvel mostrou bons resultados, porém, utilizando-se somente água e acetonitrila na fase móvel foi possível obter adequada separação da sulfadiazina e sulfatiazol, fase móvel que apresentou melhor sensibilidade e resolução para os picos cromatográficos dos compostos em estudo.

CONCLUSÕES:
As condições experimentais estabelecidas foram adequadas à separação das sulfonamidas, obtendo-se sensibilidades apropriadas à determinação dos resíduos destes fármacos em mel. Foram encontrados Limites de Detecção de 0,02-0,06 µg mL^-1 e Limites de Quantificação de 0,10 -0,30 µg.mL^-1.

Instituição de fomento: Banco do Nordeste (BNB); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Palavras-chave: sulfonamidas, cromatografia líquida, mel

E-mail para contato: veronica@quimica.ufma.br