C. Ciências Biológicas - 8. Genética - 3. Genética Humana e Médica
ANÁLISE MUTACIONAL DO GENE SRD5A2 PARA DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL DA DEFICIÊNCIA DE 5-REDUTASE TIPO 2 EM PACIENTES 46,XY
Flávia Leme de Calais1, 2
Reginaldo José Petroli1, 2
Andréa Trevas Maciel Guerra1, 3
Gil Guerra Junior1, 3
Maricilda Palandi de Mello1, 2
1. Universidade Estadual de Campinas
2. Centro de Biologia Molecular e Engenharia Genética, CBMEG-UNICAMP
3. Depto. de Genética Médica, FCM-UNICAMP; Depto. de Pediatria, FCM-UNICAMP.
INTRODUÇÃO:A enzima 5α-redutase tipo 2 é responsável por catalisar a conversão da testosterona (T) em diidrotestosterona (DHT), sendo este último, o hormônio chave da virilização da genitália externa masculina e responsável pelo estabelecimento dos caracteres sexuais secundários durante a puberdade. Mutações no gene 5-redutase tipo 2 (SRD5A2) resultam no pseudo-hermafroditismo masculino (PHM), de herança autossômica recessiva, na qual a conversão da testosterona em DHT é nula ou defeituosa. O diagnóstico da deficiência de 5-redutase tipo 2 em recém-nascidos com ambigüidade genital pode ser confirmado com a identificação da alteração molecular no gene específico SRD5A2, localizado em 2p22 – 23. A presente pesquisa tem como objetivo principal identificar as alterações moleculares no gene SRD5A2, em pacientes com ambigüidade genital, cariótipo 46,XY, diagnóstico clínico e (ou) laboratorial de PHM por deficiência na enzima 5α-redutase tipo 2; e pesquisar a existência de alterações moleculares no gene SRD5A2 em pacientes com PHM de etiologia não definida.
METODOLOGIA:Foram estudados quatro pacientes com AG (presença de hipospadia e micropênis, com ou sem criptorquidia) com cariótipo 46,XY e produção normal de testosterona para a idade. As amostras de DNA genômico foram obtidas a partir de sangue total periférico. A metodologia de extração de DNA utilizada é a de lise com Proteinase K (Boehringer Mannhein) padronizada no laboratório de Genética Molecular Humana-CBMEG. Foi realizada a amplificação dos 5 exons do gene pela reação em cadeia da polimerase (PCR), e rastreamento das mutações por seqüenciamento automático (ABI PRISMTM 3700) direto dos produtos de amplificação. As seqüências obtidas foram analisadas por comparação à seqüência do gene normal, utilizando o programa Chromas e Generunner v.3.05 ou outro programa de análise de seqüências.RESULTADOS:Nos experimentos realizados até o momento, foram encontrados os polimorfismos no exon 1 do gene SRD5A2, conforme número de acesso no banco de SNPs do NCBI: Paciente 1 - rs523349 (G em homozigose) e rs522638 (C em homozigose). Paciente 2 - rs523349 (heterozigose G/C) e rs619857 (heterozigose C/T). Paciente 3 - rs523349 (heterozigose G/C) e rs522638 (heterozigose T/C). Paciente 4 - rs523349 (heterozigose G/C). Os demais exons serão seqüenciados para detecção e identificação de possíveis alterações moleculares.CONCLUSÕES:Os resultados obtidos demonstraram variações polimórficas encontradas apenas no exon 1, as quais sugerem que haja neste exon um hot spot para variações. Essas, quando associadas às alterações nos exons que compõem o gene, podem acarretar alterações fenotípicas que caracterizam a deficiência da enzima 5-redutase tipo 2. A identificação precoce de mutações no gene SRD5A2 pode contribuir não somente para confirmação da deficiência de 5-redutase tipo 2 e condução apropriada dos afetados, mas também para a orientação adequada de seus familiares e para um melhor entendimento das bases moleculares da deficiência. Dessa forma, a contribuição deste estudo, aliada ao diagnóstico clínico, é de valor incalculável no sentido de definir a conduta a ser seguida nos casos afetados, tanto no que diz respeito ao tratamento quanto à orientação e definição do sexo de criação.
Instituição de fomento: CNPq
Palavras-chave: gene SRD5A2, enzima 5α-redutase tipo 2, pseudo-hermafroditismo masculino (PHM).
E-mail para contato: fla.leme@hotmail.com
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