Os distúrbios afetivos, entre eles a depressão, têm adquirido uma importância cada vez mais acentuada na sociedade moderna, representando uma resposta exagerada e distorcida às circunstâncias estressantes, próprias desta sociedade. O cloridrato de amitriptilina (AMT), comercializado no Brasil como TryptanolÒ, é um antidepressivo tricíclico inibidor da captação de noradrenalina e serotonina pelos sinaptossomos cerebrais. Procedimentos analíticos confiáveis, precisos e sensíveis para a determinação de AMT e seu metabólito ativo, a nortriptilina (NORT), no plasma são importantes ferramentas na monitorização de pacientes e no diagnóstico de intoxicações agudas e/ou letais. Assim, o objetivo deste estudo é otimizar e validar dois diferentes processos de preparo das amostras, a extração líquido-líquido (ELL) e em fase sólida (SPE), da AMT e da NORT em plasma, seguida da análise cromatográfica em fase líquida (CLAE) em condições previamente otimizadas para estes compostos.

Utilizou-se pool de plasma “branco” adicionado com padrões de AMT, NORT, e de desipramina (DES) como padrão interno. As variáveis estudadas para a extração líquida-líquida foram: solvente de extração, adição de sal, número de extrações e tipo de agitação a ser usada; para a extração em fase sólida em C18: condicionamento do cartucho, lavagem e eluição dos analitos; para a cromatografia líquida de alta eficiência: padrão interno, fase móvel e sua vazão, comprimento de onda e temperatura do forno. A CLAE foi realizada em cromatógrafo à líquido Shimadzu LC 10 AVP, com coluna Lichrospher ^® 60 RP – Select B, Merck (250mm x 4mm x 5μm), e pré-coluna similar LiChroCART^® 4-4, Merck e detecção em ultra-violeta a 254 nm.

As condições estabelecidas para a ELL foram: 0,5mL de plasma, 4,0mL de  éter/n-hexano (1:1) em única extração, 100mg de NaCl e agitação por 3 min. A fase orgânica foi seca, ressuspensa com 100mL da fase móvel, sendo 40mL injetados no CLAE. Para a SPE as condições foram: 1,0mL de plasma diluído de NAHCO₃/água (1:2), pH 10,0, condicionamento do cartucho com 6,0mL de metanol (MeOH), 6,0mL de acetonitrila (ACN) e 6,0mL de água; lavagem com 1,0mL de  H₂O/ ACN (8:2) e 1,0 mL de  H₂O/ACN/MeOH (2:3:3) e eluição com 4,0mL MeOH/ACN (8:2). O eluato foi pré-concentrado em banho de água a 40 °C, ressuspenso com 100mL da fase móvel, sendo injetados 40mL no CLAE. Os métodos foram então validados, sendo os parâmetros definidos para a ELL: linearidade de 20 a 400ng/mL (y = 0,0093x + 0,0959, r = 0,9967 para a AMI e y = 0,0074x + 0,0765, r = 0,9887 para a NORT); limites de detecção e de quantificação de 10ng/mL e 20ng/mL (AMI e NORT); recuperação entre 76,2 e 90,7 % (AMI) e 83,9 e 122,5% (NORT); precisão intra-ensaio com CVs entre 8,7 e 18,4 % (AMI) e 9,4 e 15,5 % (NORT). Na SPE-C18, os parâmetros estabelecidos foram: linearidade de 20 a 400ng/mL (y = 0,0049x + 0,0033, r = 0,9978 para a AMI, y = 0,0052x - 0,0098, r = 0,9978 para a NORT); limites de detecção e de quantificação de 5,0ng/mL e 10ng/mL (AMI e NORT); recuperação entre 93,2 e 117,9 % (AMI) e 76,9 e 117,3 % (NORT); precisão intra-ensaio com CVs entre 3,2 e 16,4 % (AMI) e 3,7 e 19,7 % (NORT).

Ambas as técnicas de extração denotaram condições satisfatórias para emprego na monitorização terapêutica de pacientes e/ou no diagnóstico de intoxicações por amitriptilina, visto o amplo intervalo linear dos métodos. Entretanto, o uso da SPE-C18 permite a determinação de quantidades mais baixas do fármaco com relação à ELL, apesar de seu custo ser mais elevado e demandar maior tempo.