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E. Ciências Agrárias - 7. Ciência e Tecnologia de Alimentos - 4. Ciência e Tecnologia de Alimentos

CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE Lactobacillus plantarum ISOLADOS A PARTIR DA MICROBIOTA NATURAL DE SALAMES ARTESANAIS

Maristela Cortez Sawitzki 1
Ângela Maria Fiorentini 2
Caroline Tagliari 1
Teresinha Marisa Bertol 3
Ernani S. Sant’Anna 1
Ana Carolina M. Arisi 1
(1. Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC; 2. Universidade de Ijuí - UNIJUÍ; 3. EMBRAPA Suínos e Aves - Concórdia/SC)
INTRODUÇÃO:

Na moderna biotecnologia de alimentos, a adição de microrganismos desejáveis (cultivos iniciadores) em produtos cárneos fermentados atende a diferentes propósitos: melhorar a segurança (inativação de patógenos), e a estabilidade (extensão da vida de prateleira do produto, inibindo mudanças indesejáveis provocadas por microrganismos deteriorantes), estimular transformações desejáveis (modificação da matéria-prima para obter diferentes propriedades sensoriais) e promover a saúde (por efeitos positivos na microbiota intestinal) (LÜCKE, 2000). Uma cultura iniciadora pode ser definida como uma preparação constituída por numerosa população microbiana (7 a 9 log10 UFC/g massa cárnea), incluindo  pelo menos um tipo de microrganismo, sendo utilizada para acelerar e controlar o processo de fermentação na produção  de um alimento fermentado (SMITH & PALUMBO,1983; LEROY & VUYST, 2004). Um exemplo de  transformação desejável em produtos cárneos fermentados é o rápido decréscimo do pH, como conseqüência da produção de ácido lático resultante do  metabolismo das bactérias ácidas láticas (GEISEN, LÜCKE E KRÖCKEL, 1992). Considerando a linhagem Lactobacillus plantarum como espécie láctica acidificante, desenvolveu-se o presente estudo, com o objetivo de identificar linhagens de L. plantarum obtidas a partir da microbiota natural de salames artesanais produzidos na região Sul do Brasil, utilizando a técnica molecular de Reação em Cadeia da Polimerase.

 

METODOLOGIA:

Cinco linhagens de Lactobacillus, Gram (+), catalase (-) e homofermentativos, caracterizadas como L. plantarum através de análise fenotípica - API 50CHL (BioMérieux).  O DNA bacteriano de cada linhagem e de cada linhagem padrão: L. plantarum ATCC 8014 e L. pentosus ATCC 8041, foi extraído conforme protocolo:Wizard® Genomic DNA Purification Kit (Promega Corporation, 2002). As concentrações de DNA foram estimadas por leitura espectrofotométrica e procedeu-se a caracterização molecular através de PCR, Utilizou-se uma linhagem padrão de L. pentosus e oligonucleotídeos específicos para L. pentosus considerando significativa similaridade fenotípica e genotípica entre L. plantarum e L. pentosus. Os oligonucleotídeos específicos utilizados para a PCR foram designados de acordo com Berthier & Ehrlich (1998): 16F/Lpl para identificar L. plantarum e o par 16F/Lpe para identificar L. pentosus. O iniciador senso 16F (5’-GCTGGATCACCTCCTTTC – 3’) hibridiza na região 16S rRNA conservada entre várias linhagens de lactobacillus e os oligonucleotídeos reversos   Lpl (5’-ATGAGGTATTCAACTTATG – 3’) para L. plantarum e Lpe (5’- GTATTCAACTTATTAGAACG - 3’) para L. pentosus hibridizam na região 16S e 23 S. sítio da região 16S/23S de L. As reações foram realizadas com PCR Master Mix Promega sob condições referidas por Berthier & Ehrlich (1998). Após a amplificação, o produto da PCR foi submetido à eletroforese em gel de agarose 2,5 % e visualizado sob luz ultravioleta.

 

RESULTADOS:
A análise morfológica e fenotípica (API 50 CHL – BioMérieux) das referidas linhagens, apresentou resultados com determinado grau de incerteza quanto a classificação taxionômica: três linhagens apresentaram probabilidade de identificação igual ou maior que 97,8%, e  duas outras  linhagens apresentaram probabilidade de identificação igual a 53% e 65,8% para L. plantarum. A análise por PCR demonstrou perfil genotípico de L. Plantarum somente as linhagens com caracterização morfológica e fenotípica igual ou maior que 97,8% de probabilidade de identificação. As linhagens com probabilidade identificação igual a 53% e 65,8% para L. plantarum não corresponderam aos perfis genotípicos de L. plantarum e de L. pentosus.. Conforme Nigatu (2000), de dez linhagens caracterizadas fenotipicamente como L. plantarum, cinco não corresponderam ao mesmo perfil genômico para L. plantarum quando realizada análise molecular por PCR. Reenen & Dicks (1996) concluem que fermentação de açúcares não são suficientes para classificação filogenética de L. plantarum e L. pentosus, pois existe similaridade entre as duas linhagens nestas reações. Segundo Berthier & Ehrlich (1998), linhagens de L. plantarum, L. pentosus e L. paraplantarum apresentam similaridade na seqüência rRNA e quando utilizados oligonucleotideos específicos 16F/Lpl and 16F/Lpe foi possível diferenciar as linhagens de L. plantarum das de L. pentosus, o que no presente trabalho também foi evidenciado.
CONCLUSÕES:
Dados fenotípicos auxiliam e são significativos para uma primeira classificação de diferentes espécies de Lactobacillus, sendo necessário complementar o estudo taxionômico com a análise molecular específica para uma maior segurança na identificação de linhagens de L. plantarum.
Instituição de fomento: Universidade Federal de Santa Catarina; EMBRAPA Suínos Aves e UNIJUÍ
 
Palavras-chave: Bactérias acido lácticas; Lactobacillus plantarum ; caracterização molecular.
Anais da 58ª Reunião Anual da SBPC - Florianópolis, SC - Julho/2006