| D. Ciências da Saúde - 2. Medicina - 8. Medicina |
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ANÁLISE DE METILAÇÃO DO GENE ATM EM TUMORES PRIMÁRIOS DE MAMA |
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| Vivian Carla da Silva Gomes 1 |
| Maria Aparecida Nagai 2 |
| Sibeli Salaorni 2 |
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| (1. Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo - FMUSP - graduação; 2. Departamento de Radiologia - Faculdade de Medicina da USP - FMUSP) |
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| INTRODUÇÃO: |
EM 1995, YOSEF SHILOH E COLABORADORES DESCOBRIRAM O GENE ATM, MUTADO EM PACIENTES AFETADOS PELA DOENÇA AUTOSSÔMICA RECESSIVA ATAXIA-TELEANGIECTASIA (AT), QUE APRESENTAM ATAXIA PROGRESSIVA, TELEANGIECTASIA ACULOCUTÂNEA E MAIOR SUSCETIBILIDADE AO DESENVOLVIMENTO DE TUMORES, ENTRE OUTRAS CARACTERÍSTICAS.
MUITO CONSERVADO NOS VERTEBRADOS E LOCALIZADO NO CROMOSSOMO 11Q23, O GENE ATM TEM 66 EXONS E OCUPA APROXIMADAMENTE 150 KB DE DNA GENÔMICO. A PROTEÍNA CODIFICADA PELO GENE ATM PERTENCE À FAMÍLIA DAS FOSFATIDILINOSITOL-3 QUINASES QUE RESPONDEM AOS DANOS DO DNA FOSFORILANDO SUBSTRATOS-CHAVE ENVOLVIDOS NO REPARO E/OU NO CONTROLE DO CICLO CELULAR. A ATIVIDADE INTRÍNSECA DE PROTEÍNA QUINASE C DA ATM É EXTREMAMENTE IMPORTANTE PARA O BOM FUNCIONAMENTO DE DIVERSOS PONTOS DE CHECAGEM DO CICLO CELULAR SENSÍVEIS A DANOS NO DNA.
A REDUÇÃO OU AUSÊNCIA DE ATIVIDADE NORMAL DO GENE ATM PODE LEVAR O INDIVÍDUO A DESENVOLVER TUMORES MAIS FACILMENTE. ALGUNS ESTUDOS INDICAM QUE APROXIMADAMENTE 3 A 8% DOS CÂNCERES DE MAMA OCORREM EM MULHERES HETEROZIGOTAS PARA MUTAÇÃO NO GENE ATM. AS MUTAÇÕES MAIS COMUMENTE ENCONTRADAS EM PACIENTES AT (85% DOS CASOS) SÃO DO TIPO “FRAMESHIFT” E “NONSENSE” OU DECORRENTES DE ALTERAÇÃO DE “SPLICING”. AMBAS AS SITUAÇÕES RESULTAM NA PRODUÇÃO DE UMA PROTEÍNA TRUNCADA, GERALMENTE SEM FUNÇÃO. ENTRETANTO, A MAIOR PARTE DOS PACIENTES COM CÂNCER DE MAMA E LEUCEMIA APRESENTAM MUTAÇÕES DO TIPO "MISSENSE". SABE-SE QUE MUITOS OUTROS MECANISMOS ALÉM DAS MUTAÇÕES PROPRIAMENTE DITAS PODEM ALTERAR A EXPRESSÃO DE UM GENE E SER RESPONSÁVEIS PELO SURGIMENTO DE TUMORES. DENTRE ELES DESTACAM-SE AS ALTERAÇÕES DE METILAÇÃO, PRINCIPALMENTE AQUELAS QUE AFETAM REGIÕES PROMOTORAS DE GENES-CHAVE FREQÜENTEMENTE ENVOLVIDOS NO PROCESSO DE TUMORIGÊNESE COMO ONCOGENES, SUPRESSORES DE TUMOR E GENES ENVOLVIDOS NO REPARO DE DANOS AO DNA. EXISTE UMA CORRELAÇÃO INVERSA ENTRE O GRAU DE METILAÇÃO E OS NÍVEIS DE TRANSCRIÇÃO DE UM GENE. PODE-SE INFERIR QUE HIPERMETILAÇÕES DA REGIÃO PROMOTORA DO GENE ATM PODERIAM, PORTANTO, RESULTAR NO FENÓTIPO TUMORIGÊNICO, INDEPENDENTE DA PRESENÇA DE MUTAÇÕES, POIS SUA EXPRESSÃO ESTARIA COMPROMETIDA. DIMINUIÇÃO OU AUSÊNCIA DE EXPRESSÃO DO GENE ATM TEM SIDO OBSERVADA EM CARCINOMAS DE MAMA; ENTRETANTO, OS MECANISMOS RESPONSÁVEIS PELA REDUÇÃO DOS NÍVEIS DE EXPRESSÃO DO ATM NÃO ESTÃO AINDA ESTABELECIDOS. Objetivos: Investigar a ocorrência de hipermetilação do gene ATM em tumores de mama primários através de análise de metilação pelo método MSP (PCR associada a tratamento com bissulfito de sódio). |
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| METODOLOGIA: |
Foram obtidas do Hospital do Câncer A.C. Camargo amostras de tumores de 100 pacientes com câncer de mama, antes de qualquer tratamento. O DNA foi extraído pelo método fenol-clorofórmio e precipitado com etanol. A Análise de metilação do gene ATM foi realizada pela técnica MSP (methylation specific PCR), que envolve a modificação do DNA por bissulfito de sódio e posterior amplificação por hot-start PCR, utilizando-se oligonucleotídeos específicos para regiões metiladas e não metiladas. Após a amplificação, O DNA foi submetido a corrida eletroforética em gel de agarose 2% corado com brometo de etídeo. |
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| RESULTADOS: |
Encontramos hipermetilação do promotor do gene ATM em 11% das amostras analisadas. |
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| CONCLUSÕES: |
O gene ATM é um gene supressor de tumor cuja expressão tem papel importante na manutenção da integridade do genoma. Diminuição ou ausência de expressão do gene ATM tem sido observada em carcinomas de mama. A hipermetilação da região promotora do gene ATM poderia ser um dos mecanismos envolvidos na redução de expressão e inativação desse gene em câncer de mama. Em nosso estudo porém, observamos baixa frequência de hipermetilação nos tumores analisados, sugerindo que a metilação da região promotora do gene ATM é um evento raro em câncer de mama. |
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Instituição de fomento: FAPESP
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Trabalho de Iniciação Científica
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Palavras-chave: ATM; câncer de mama; metilação. |
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| Anais da 58ª Reunião Anual da SBPC - Florianópolis, SC - Julho/2006 |