O proteassoma 20S é um complexo enzimático com 750kDa apresentando uma estrutura composta por quatro anéis superpostos com sete subunidades cada um, num arranjo alfa7, beta7, beta7, alfa7, onde as subunidades do tipo alfa apresentam função estrutural e as betas catalíticas, com atividades peptidásicas semelhantes a caspase, tripsina e quimiotripsina (beta 1,2 e 5 respectivamente). A forma predominante do proteassoma encontrado em eucariotos inferiores é o proteassoma 26S, cujo papel principal é a degradação de proteínas tanto de uma maneira dependente quanto independente de ubiquitina. Recentemente foi descrito que a inibição do proteassoma em T. cruzi inibe a transformação de tripomastigota em amastigota. Apesar destas evidências, tanto a organização genômica quanto o padrão de expressão destes genes nas diferentes fases evolutivas deste parasita ainda permanece para ser compreendida. Diante destas considerações, nosso trabalho teve como objetivo principal determinar o padrão de expressão da subunidade beta 1 do proteassoma 20S de T.cruzi.

Inicialmente extraímos DNA genômico a partir de epimastigotas da cepa Y de T. cruzi. Cerca de 250ng desta preparação foram utilizados em experimentos de PCR, utilizando um par de oligonucleotídeos beta 1 específico, baseado na seqüência Tc00.1047050350760340, obtida no projeto genoma do T. cruzi e disponível no banco de dados www.genedb.org. Após a confirmação da especificidade dos oligonucleotídeos utilizados através do sequênciamento do produto de PCR, utilizamos os mesmos oligos e RNA total, extraídos das formas amastigota, epimastigota e tripomastigota da cepa Y de T. cruzi para estudar a expressão deste gene através da técnica de RT-PCR semi-quantitativo. Também é objetivo deste trabalho determinar o perfil de expressão do gene beta-1 em formas epimastigotas de T. cruzi I (cepa Colombiana) e T. cruzi II (CL, CL-Brenner, Berenice-62, Berenice-78 e Y) utilizando RT-PCR semi-quantitativo.

Os nossos resultados mostram que os níveis de mRNA da subunidade beta 1 do proteassoma 20S são três vezes mais abundantes em epimastigota quando comparados aos níveis detectados em amastigota e tripomastigota. Esses resultados sugerem que os níveis de mRNA para subunidade beta 1 podem estar sujeitos a um controle transcricional estágio-específico. Além disso, resultados preliminares sugerem a ausência de um padrão cepa específico de expressão quando utilizamos epimastigotas de T. cruzi I (cepa Colombiana) e T. cruzi II (CL, CL-Brenner, Berenice-62, Berenice-78 e Y).

Esses resultados mostram evidências de que o gene beta-1 do proteassoma 20S de T. cruzi apresenta uma maior variação de expressão quando comparamos as formas evolutivas de amastigota, tripomastigota e epimastigota do que quando comparamos a forma epimastigota de T. cruzi I (cepa Colombiana) e T. cruzi II (CL, CL-Brenner, Berenice-62, Berenice-78 e Y). Futuras análises de atividade deste complexo proteolítico nos estágios e cepas em estudo poderão evidenciar a contribuição desta protease na biologia celular deste parasito.