MODELOS EXPERIMENTAIS EMPREGANDO ISÓTOPOS RADIOATIVOS PARA AVALIAÇÃO DO EFEITO DE PRODUTOS NATURAIS

Moreno, S. R. F*^1,2, Godinho, C. R^2,3, Rebello, B. M^2,3, Arnobio, A¹, Rocha, E. K²., Oliveira, S A¹, Bernardo-Filho, M^2,4, Caldas, LQA¹

1. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, CPC, Universidade Federal Fluminense, RJ, 2. Instituto de Biologia, LRE, Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, RJ; 3. Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, RN. 4. Instituto Nacional do Câncer, Rio de Janeiro, RJ. *E-mail: srfmoreno@ig.com.br

Nos dias de hoje, tem sido crescente em ciências da saúde, a utilização de modelos experimentais com isótopos radioativos para estudar a interação de drogas com radiofármacos. O radionuclídeo empregado no presente estudo é o tecnécio-99m (Tc-99m), visto que, as características físicas, químicas, biológicas e econômicas, o torna altamente atraente para a utilização como radiotraçador ou radiofármaco. Hemácias (C) podem ser marcadas com Tc-99m e empregadas em diagnóstico e terapia na medicina nuclear. Tem sido descrito que vários fatores interferem na marcação de constituintes do sangue com Tc-99m, na biodistribuição do radiofármaco pertecnetato de sódio (Na ^99mTcO₄) e na morfologia celular, e dentre eles estão os produtos naturais. O extrato de Ginkgo biloba (EGb) é um produto natural que compõe um dos principais recursos terapêuticos da fitoterapia e medicina popular. É estimulante da circulação sanguínea e além da ação anti-coagulante, tem atividade anti-oxidante e anti-inflamatória. O extrato de sabugueiro (Sambucus nigra L) é um produto com várias propriedades, dentre elas, ação diurética e anti-reumática. O extrato da folha de maracujá (Passiflora edulis f. flavicarpa) apresenta propriedade analgésica e sedativa, e recentemente tem sido descrito que a farinha da casca deste fruto apresenta atividade hipoglicemiante. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do extrato de Ginkgo biloba, do sabugueiro e da farinha da casca de maracujá: na marcação de hemácias (e na sua morfologia) e de proteínas plasmáticas com Tc-99m, e também avaliar o efeito do extrato de EGb na biodistribuição do radiofármaco Na^99mTcO₄ e na morfologia (microscopia óptica) de órgãos. Sangue heparinizado de ratos Wistar foi incubado com extratos de Ginkgo biloba, do sabugueiro e farinha da casca de maracujá em diferentes concentrações durante 60 minutos. Em seguida, as amostras foram incubadas com 0,5ml de cloreto estanoso (60 min) e com 0,1 ml de Tc-99m (10min). Plasma (P) e células (C) foram isolados por centrifugação. Amostras de P e C foram também precipitados com ácido tricloroacético 5%, centrifugadas e separadas as frações solúveis (FS-P e FS-C) e insolúveis (FI-P e FI-C). As porcentagens de atividade radioativa (% ATI) das amostras foram determinadas. Para o estudo do efeito do extrato de Ginkgo biloba na biodistribuição do Na^99mTcO₄, ratos Wistar receberam (via intragástrica) o EGb (40 e 400 mg/ml do extrato cru) e depois foi administrado por via endovenosa o Na^99mTcO₄. Os animais foram puncionados, sacrificados e foi realizada a determinação da % ATI dos órgãos. Amostras de sangue de animais tratados com EGb também foram submetidas ao processo de marcação com Tc-99m. Preparações histológicas foram realizadas e a morfologia das hemácias avaliada. Para avaliação morfológica dos órgãos, procedeu-se à fixação de fragmentos do rim, fígado e duodeno e a obtenção de cortes. As imagens foram capturadas em computador. Nas amostras tratadas in vitro com o EGb (extrato cru, 40 e 20 mg/ml), (i) a % ATI nas hemácias foi reduzida de 97,2 ± 1,9% para 64,8 ± 6,5% e 71,1 ± 7,5%, respectivamente (ii) a % ATI na FI-P foi reduzida de 80,7 ± 2,9% para 20,2 ± 2,2% e 20,9 ± 7,3%, respectivamente e (iii) a % ATI na FI-C foi reduzida de 86,6 ± 5,0% para 75,5 ± 9,0% e 83,1 ± 6,0%, respectivamente. A avaliação microscópica das amostras tratadas in vitro com EGb revelou alterações morfológicas significativas (p<0,05) nas hemácias. O extrato sabugueiro foi capaz de alterar a marcação somente das hemácias, de 96,5±1,03 (controle) para 46,4±3,0% (maior concentração). A análise morfológica mostrou o aumento do volume das hemácias e lesão de sua membrana celular. A farinha da casca de maracujá não interferiu na marcação das hemácias, porém a %ATI na FI-P foi reduzida de 72,7 ± 3,4 (controle) para 53,9 ± 6,7 (100%), 64,0 ± 3,1 (50%), 67,9 ± 1,7 (25%) e 67,3 ± 5,6 (12,5%) (p<0,05). O extrato de maracujá também promoveu alterações morfológicas nas hemácias, que se apresentaram crenadas. O tratamento in vivo com o extrato de Ginkgo biloba, demonstrou que o extrato não promoveu mudanças na % ATI das hemácias, das proteínas celulares (FI-C) e na morfologia das células, mas aumentou a ligação às proteínas plasmáticas (FI-P). A análise de % ATI dos órgãos indica que houve redução (P<0,05) na captação do Na^99mTcO₄ pelo duodeno em animais tratados com EGb. No rim e no fígado observou-se um aumento na captação (P>0,05) deste radiofármaco em animais tratados com Ginkgo biloba. A avaliação microscópica destes órgãos revelou que o EGb promoveu importantes alterações morfológicas dos mesmos. Os mecanismos de ação do EGb, do extrato de sabugueiro (Sambucus nigra L) e do extrato da farinha da casca de maracujá (Passiflora edulis f. flavicarpa) na marcação e na morfologia de hemácias podem ser explicados pela: inibição direta do íon estanho e pertecnetato, ou alterações na membrana, ou competição dos citados íons aos mesmos sítios de ligação, ou ainda por ação oxidante. Alterações morfológicas no rim, fígado e duodeno promovidas pelo EGb poderiam ser explicados pela provável metabolização do extrato formando compostos capazes (nas condições estabelecidas) de promover danos celulares observados em microscopia óptica.

Suporte Financeiro: CAPES, UFF, UERJ, CNPq