| | E. Ciências Agrárias - 1. Agronomia - 3. Fitossanidade | | | ESTRATÉGIA PARA SELEÇÃO IN VITRO CONTRA A DOENÇA FUSARIOSE EM PIMENTEIRA-DO-REINO (Piper nigrum L.) | | | Oriel Filgueira de Lemos 1 (autor) | | Akihiko Ando 2 (autor) | | Janaína de Cássia Albino 3 (autor) | | Sérgio Augusto Oliveira Alves 4 (autor) sergiobioufpa@ig.com.br | | Leila Márcia Souza do Amaral 5 (autor) | | Clévea Rossana Ferreira da Silva 5 (autor) |
| | 1. Embrapa Amazônia Oriental, Belém/PA | | 2. Departamento de Genética e Melhoramento, ESAL/USP, Piracicaba/SP | | 3. Centro de Energia Nuclear na Agricultura, CENA/USP, Piracicaba/SP | | 4. Departamento de Ciências Biológicas, UFPA, Belém/PA | | 5. Departamento de Agronomia, UFRA, Belém-PA | | 6. Departamento de Agronomia, UFRA, Belém-PA |
| | INTRODUÇÃO:
A cultura da pimenteira-do-reino tem como principal ponto agronômico limitante para a expansão e maior lucratividade, a ocorrência da doença fusariose. Um método adequado para a seleção de genótipos resistentes à doença é uma ferramenta importante no melhoramento genético da cultura. Há ausência de fonte de resistência no Brasil e o método de melhoramento genético através da indução de mutação em associação às técnicas in vitro tem sido adotado como alternativa para a solução deste problema. Considerando estes aspectos, a seleção in vitro permite selecionar novos genótipos com potencial para a resistência a doença, reduzindo a quantidade de material a testar em campo e custos de experimentação. Fungos do gênero Fusarium tem sido cultivados em meio de cultura líquido para produção de metabólitos sucudários. O uso de metabólitos secundários produzidos e adicionados aos meios de cultura para micropropagação das plantas in vitro tem sido uma estratégia utilizada em seleção in vitro visando a resistência a doença causada por Fusarium em bananeira e abacaxizeiro por diferentes autores. Este trabalho teve por objetivo estabelecer uma estratégia de seleção in vitro de plantas com potencial para resistência à doença fusariose em pimenteira-do-reino a partir do uso de filtrado do cultivo do fungo Fusarium solani f. sp. piperis em meios de cultura de multiplicação de plantas in vitro visando dar suporte ao método de mutagênese in vitro com o uso da radiação gama. | | METODOLOGIA:
Isolados do fungo Fusarium solani f. sp. piperis foram cultivados em meio de cultura BSA (Batata-sacarose-agar). Após duas semanas, discos de 1cm com micélio do fungo foram transferidos para meio de cultura de Czapek-Dox na proporção de um para cada 200 ml de meio de cultura. Durante 35 dias foram realizadas observações quanto ao número de macro e micro conídios por ml aos 8, 11, 14, 17, 23, 29 e 35 dias de cultivo, e no final do período, as hifas obtidas foram secas em estufa a 40oC durante 48 h e pesadas. Uma curva de crescimento foi obtida com os dados através do programa Excel. Os filtrados foram obtidos através da filtragem e esterilização da cultura. Para testar a fitotoxicidade do filtrado, um experimento com filtrado proveniente de 28 dias de cultivo do fungo a diferentes concentrações (0, 20, 30, 40 e 50% v/v) em meio de cultura básico MS suplementado com BAP (0,5 mg.L-1) e IAA (0,2 mg.L-1) - meio de multiplicação de gemas- e duas formas de esterilização do filtrado, foram testadas. A primeira através de filtro estéril de 0,22 mm (FE); e a segunda por autoclavagem por 20 minutos (AII), adicionados na concentração desejada ao meio de multiplicação de gemas. Para cada tratamento, foram utilizadas duas repetições, sendo cada repetição representada por cinco gemas. A avaliação foi realizada quanto a percentagem de mortalidade das gemas. Os dados foram submetidos às análises de variância, teste Tukey para comparação de médias e análise de regressão linear. | | RESULTADOS:
A média de produção de conídios atendeu à curva de crescimento do fungo relativo à estimativa do número de conídios por ml. Aos 8 dias de cultivo a produção de conídios atingiu cerca de 8x104 e aos 29 dias 3x105, para em seguida iniciar a redução. A produção de hifas quanto ao peso seco variou de 1.070 a 1.153 mg após 35 dias de cultivo, média de 1.098 mg para 200 ml de meio de cultura. A curva de crescimento (r2 = 0,9812) indicou que entre 0 a 20 dias ocorreu a fase exponencial e a partir do 23o dia, a fase estacionária e de declínio após o 29o dia. Este aspecto permitiu inferir a tendência de que, a produção de metabólitos secundários e conseqüentemente de fitotoxinas deve estar em maior concentração nesse intervalo de tempo, entre 23 e 29 dias de cultivo. Houve fitotoxicidade do filtrado do fungo às gemas sob as duas formas de esterilização (FE e AII). Nenhuma gema se desenvolver a partir da concentração de 30% FE e estimou-se a concentração de 40% FE (r2 = 0,7474) para causar 100% de mortalidade de gemas de plantas susceptíveis à doença fusariose. Sob a forma de esterilização do filtrado do fungo por duas autoclavagens (AII), somente à concentração de 50% AII, não houve diferenciação das gemas. Observou-se 80, 60 e 20% de diferenciação de gemas à 20, 30 e 40% AII, respectivamente. Estimou-se, pela análise de regressão, a concentração de 52,1% AII (r2 = 0,8829) como agente seletivo para causar mortalidade de 100% de gemas susceptíveis. | | CONCLUSÕES:
O do fungo apresenta crescimento exponencial nos primeiros 20 dias e de declínio após 29 dias de cultivo. O filtrado da cultura do fungo Fusarium solani f. sp. piperis tem ação contra o desenvolvimento de gemas in vitro de plantas susceptíveis tanto esterilizado com filtro estéril quanto por autoclavagem, sendo efetivo em menor concentração por filtro esterilização do que por autoclavagem. Concentrações acima de 40% FE e 50% AII causam 100% de morte das gemas in vitro. A seleção in vitro através do uso do filtrado do fungo em meios de cultura de multiplicação de gemas apresenta-se como uma alternativa para separação de gemas susceptíveis de gemas com potencial para resistência à doença fusariose em programas de melhoramento genético da cultura quando estiver associado às técnicas de cultura de tecidos. | | | | | Trabalho de Iniciação Científica | | | Palavras-chave: Seleção in vitro; Pimenteira-do-reino; Fusarium solani f. sp. piperis. |
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Anais da 56ª Reunião Anual da SBPC - Cuiabá, MT - Julho/2004 |