64ª Reunião Anual da SBPC

C. Ciências Biológicas - 10. Microbiologia - 3. Microbiologia

INIBIÇÃO DO CRESCIMENTO BACTERIANO “in vitro” POR METABÓLITOS DE Lactobacillus lactis E Lactobacillus acidophillus

Rubens Ferracini Junior 1 Fernanda Ancona Tardelli 1 Virna Aina Mankievich 1 Aristeu Gomes da Costa 1

1. Laboratório II - Microbiologia - Departamento de Farmácia - Centro Universitário Barão de Mauá

INTRODUÇÃO:

A indústria de alimentos vem atualmente desenvolvendo e apresentando muitos produtos baseados nos conceitos de probióticos e prébióticos. Nestas condições microrganismos viáveis presentes no alimento, não seriam mero resíduo do processo de fermentação ou outra manipulação no processo de transformação do alimento, mas sim parte integrante deste, e com funções benéficas e específicas para o resultado global do uso deste alimento. Normalmente estas bactérias são espécies já presentes na microbiota intestinal humana, transformadas ou não, ou então cepas “equivalentes”, que podem desempenhar papéis como impedir a instalação de patógenos, estimular a assimilação de nutrientes e eliminação de excretas, estimular a movimentação peristáltica do intestino, estimular atividade imunológica, direta ou indiretamente e produzir substâncias que controlem a densidade microbiana no trato gastrointestinal. Entre os principais grupos microbianos de interesse estão várias bactérias anaeróbias ou fermentadoras, e principalmente as bactérias lácticas, como os gêneros Lactobacillus e Lactococcus. Neste contexto, o presente trabalho avaliou a capacidade de metabólitos de Lactobacillus lactis e Lactobacillus acidophilus, de inibirem o crescimento bacteriano “in vitro”.

METODOLOGIA:

Cepas de Lactobacillus lactis e Lactobacillus acidophilus, da coleção do Laboratório II de Microbiologia do Centro Universitário Barão de Mauá, foram utilizadas. As bactérias foram cultivadas em caldo BHI, por 120 h/ 37ºC. Depois, foram filtradas em membranas Millipore de 0,45 µm de diâmetro de poro e os filtrados obtidos foram adicionados de citrato de amônio, para precipitação de proteínas. Os precipitados foram purificados por diálise em água deionizada, dessecados, pesados e ressuspensos em concentrações de 12, 25, 50, 100 e 200 µg/mL, utilizadas nos ensaios biológicos. Cepas de Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e Streptococcus pyogenes foram cultivadas por 24 horas em Agar Nutriente. Destas culturas preparam-se suspensões microbianas em PBS, com 1,0x105 células/mL, que foram usadas em ensaios de atividade antimicrobiana, no modelo diluição em tubo, tendo antibióticos como penicilina, cloranfenicol e gentamicina como tratamentos controle, além de culturas de cada bactéria que não receberam nenhum tratamento.

RESULTADOS:

Os metabólitos de Lactobacillus acidophilus, apresentaram uma ação inibitória satisfatória sobre as bactérias Gram-negativas utilizadas, particularmente sobre Pseudomonas aeruginosa. Neste caso, a inibição do crescimento bacteriano já ocorreu com a menor concentração, 12 µg/mL enquanto nos casos de Escherichia coli e Salmonella enteritidis o efeito só começa a ser observado com concentração de 50 µg/mL. Praticamente nenhum efeito foi observado sobre as duas cepas de bactérias Gram-positivas utilizadas. Quanto aos metabólitos de Lactobacillus lactis, nenhum efeito foi observado frente a Streptococcus pyogenes, porém atividade inibitória frente a culturas de Staphylococcus aureus, foram observadas com tratamentos com 100 e 200 µg/mL. Também aqui, a atividade inibitória sobre o crescimento de bactérias Gram-negativas foi mais evidente, embora menos intensa do que observada com metabólitos de Lactobacillus acidophillus. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella enteritidis começaram a ser inibidas com concentrações respectivamente de de 25 µg/mL, 50 µg/mL e 50 µg/mL, dos metabólitos de Lactobacillus lactis.

CONCLUSÃO:

Algumas bactérias pertencentes à microbiota intestinal normal são capazes de produzir alguma molécula com atividade inibidora do crescimento de bactérias concorrentes. Colicinas e bacteriocinas, são relatadas, algumas delas conhecemos até a estrutura, porém, dada a diversidade da microbiota humana intestinal, imagina-se que muitas mais destas moléculas possam estar presentes nas relações entre microrgansimos no microbioma intestinal. Neste trabalho, obteve-se a sugestão que Lactobacillus lactis e Lactobacillus acidophilus, poderiam produzir compostos com estas atividades inibitórias, principalmente frente a bactérias Gram-negativas. Resultados de um trabalho introdutório, não apresentados aqui, indicaram uma ação positiva de metabólitos destas duas bactérias lácticas, obtidos tal como descritos na metodologia acima, sobre a colonização “in vivo” pelas bactérias desafiantes utilizadas também neste estudo. Entretanto, apesar do interessante dos achados, é necessário entender se a atividade inibitória observada deve-se a uma molécula presente nestes extratos proteicos utilizados nos ensaios, a todo o extrato ou a uma conjução de fatores que leve em conta todo o microbioma intestinal. O extrato proteíco obtido das culturas destas bactérias, tal como aqui obtido, está em processo de análises físico-químicas, passo importante para o entendimento de qual ou quais componentes ali presentes possam ser purificados, para avaliação em nova rodada de ensaios.

Palavras-chave: Lactobacillus lactis, Lactobacillus acidophillus, microbioma humano.